регистрация компании дать объявление быстрый поиск лента публикаций восстановление доступа о портале
    
Строительный портал СтройПлан.ру
Подбор проекта Новости отраслиПубликации
 
КОРЗИНА (0)  
 >>>  ПОИСК ДОКУМЕНТОВ  

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

24 октября 2003 г.

Дата введения: 1 декабря 2003 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации
клеток микроорганизма Trichoderma viride 44-11-62/3 -
продуцента комплекса целлюлолитических ферментов
в атмосферном воздухе населенных мест
Методические указания
МУК 4.2.1775-03

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма - Trichoderma viride 44-11-62/3 - продуцента комплекса целлюлолитических ферментов (целлюлаза, ксиланаза) в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».

2. Характеристика штамма-продуцента
Trichoderma viride 44-11-62/3

На агаризованной среде сусло-агар (содержание солодового сусла 5-6° по Баллингу) на 5 день развития микроорганизм образует характерные колонии до 5,0-5,5 см в диаметре с гладкой подошвой, слегка приподнятые над поверхностью среды, не врастающие в агар, с волнистым краем, пушистым воздушным мицелием, который покрыт спорами лимонно-желтого цвета. На 3 день развития в среду выделяется ярко-желтый пигмент лимонного оттенка. Гифы мицелия бесцветные, септированные, многократно ветвистые.

Систематическое положение микроорганизма

Класс

Fungi imperfecti

Порядок

Hyphomycetales

Род

Trichoderma

Вид

viride

Штамм

44-11-62/3

Штамм Trichoderma viride 44-11-62/3 получен во ВНИИбио-технология в лаборатории Биосинтеза ферментов методом индуцированной селекции с применением этиленимина и нитрозометилмо-чевины из исходной культуры Trichoderma viride 44 - продуцента целлюлозы и депонирован в ЦМПМ ВНИИгенетика.

Штамм-продуцент синтезирует высокоактивный комплекс целлюлолитических ферментов для производства ферментного препарата целловиридин ГЗх. Максимальная активность целлюлазы составляет 35 ед/мл, ксиланазы - 42 ед/мл .

Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Культивирование гриба происходит 5 суток при температуре 36- 38 °С, затем 5 суток при комнатной температуре. Для размножения и хранения используется сусло-агар 5-6 °Б, рН среды - 5,0-6,0.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 200 кл/м3, пометка А.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток штамма-продуцента в атмосферном воздухе в диапазоне концентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Прямой метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток (спор, фрагментов мицелия) на поверхность плотной питательной среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по культурально-морфологическим признакам на день развития.

Косвенный метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток на поверхность плотной питательной селективной среды и подсчета выросших колоний по зонам просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма, как результат продукции целлюлазы на среде с окрашенной целлюлозой.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

 

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818(щелевой прибор Кротова)

ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

 

Автоклав электрический

ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

 

Холодильник бытовой

 

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

 

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

 

Лупа с увеличением ×10

ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные, стеклянные, диаметром 100мм

 

Пробирки биологические, вместимостью20 и 35 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

ГОСТ 10515-75

ГОСТ 10515-75

ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл

ГОСТ 1770-74

Секундомер

ГОСТ 9586-75

Барометр

ГОСТ 24696-79

Марля медицинская

ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая

ГОСТ 25556- 81

 

 

5.2 Реактивы, растворы

Агаризованное пивное сусло 5 - 6 °Б для штамма-продуцента (агар - 1 ,8 %, рН 5,0 - 6,0

режим стерилизации 1,1 - 1,2 ати в течение 30 мин

 

Молочная кислота, синоним-альфа-оксипропионовая кислота (из расчета 0,4 мл на 100 мл среды

сусло-агар для подавления посторонней бактериальной флоры)

ГОСТ 490-79

Бенгальский розовый

 

Диметилсульфоксид

 

Спирт этиловый ректификат

ГОСТ 5962-67

Селективная среда для штамма-продуцента, состав среды: КН2РО4 - 1 г; MgSCО4Н2О 0,5 г;

(NH4)2SO4- 0,7 г; целлюлоза порошковая в пересчете на сухое вещество - 0,9 г; лактоза - 0,3 г.;

 дрожжевой экстракт - 0,5 г; агар -18 г; вода дистиллированная - до 1 000 мл.

 

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:

6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88..

6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.3. «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерения

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации клеток штамма-продуцента воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (5-20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента (прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента, косвенный -до 30-50 колоний на чашке).

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

При выполнении анализа воздуха прямым методом среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50-60 °С, добавляют молочной кислоты из расчета 0,4 мл на 100 мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

При выполнении анализа воздуха косвенным методом селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют 50 мг/л бенгальского розового, растворенного в 1 мл диметилсульфоксида, тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Бенгальский розовый предназначен для специфического окрашивания целлюлозы и для ограничения разрастания колоний на чашках.

Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 оС, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на 42 °С (для интенсификации развития гриба). Через 3 суток производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам и характерной пигментации среды (прямой метод) или зон просветления вокруг выросших колоний продуцента (косвенный метод), как результат продукции целлюлолитических ферментов на среде с окрашенной целлюлозой.

10. Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м' воздуха производят по формуле:

кл/м3 ,где

Х- концентрация клеток продуцента в воздухе,

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке,

1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха,

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №
количественного микробиологического анализа
штамма-продуцента Trichoderma viride44-11-62/3
в атмосферном воздухе населенных мест

1. Дата проведения анализа______________

2. Место отбора пробы__________________

3.Название лаборатории_________________

4.Юридический адрес организации_______

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл/м3

 

 

 

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Список литературы

1. Руководство по контролю загрязнения атмосферы: РД 52.04.186-96. М., 1991. 693 с.

2. ГОСТ 8.563-96. ГСИ «Методики выполнения измерений».

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с.

5. ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ». М.: Изд-во стандартов, 1981. 3 с.

6. Бабьева И. П., Зенова Г. М. Биология почв. М.: МГУ. 122 с.

СОДЕРЖАНИЕ

 

 

 

 >>>  ПОИСК ДОКУМЕНТОВ  

    Огонёк Фото: дом с пятью спальнями, верандой, балконом и навесом для авто 126 5 2 Дом с пятью спальнями, верандой, балконом и навесом для авто

    Афродита 6 Фото: дом-баня из бруса 6х6 с большой террасой 60.74 1 Дом-баня из бруса 6х6 с большой террасой

    154/158 Фото: двухэтажный дом с балконом и террасой 154 3 3 Двухэтажный дом с балконом и террасой

    Берлин Фото: брусовый дом с 5-ю спальнями 231.4 4 2 Брусовый дом с 5-ю спальнями

    51B Фото: «Вива Бе» - рациональный дом с навесом для машины 142 3 2 «Вива Бе» - рациональный дом с навесом для машины


 Рейтинг@Mail.ru   По вопросам работы сайта и сотрудничества обращайтесь к администратору adm@stroyplan.ru.
При использовании материалов портала - ccылка, доступная для индексации, на сайт обязательна.
© 2006-2016 "СТРОЙПЛАН"
    Все права защищены.